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| 产品编号 | 产品名称 | 变更类型 | 变更前 | 变更后 |
|---|---|---|---|---|
| D799082 | 木质素含量检测试剂盒 紫外比色法 | 产品说明书 | 4. 取上清加冰乙酸步骤根据自己样本乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在0.1-0.8之间即可,并在公式中参与计算。 | 4. 取上清加冰乙酸步骤根据自己样本乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在0.1-1.2之间即可,并在公式中参与计算。注意空白管也需要进行相同的调整。 |
| D799096 | 肉桂醇脱氢酶(CAD)活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 注意事项 1. 当 A1 小于 0.8,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。 |
注意事项 1. 当A1小于A1空白时,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。 |
| D799107 | 糖化酶活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8°C保存 10 mg 无水葡萄糖。临用前加 1 mL 提取液溶解为 10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用,2-8°C保存两周; 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(μL) 蒸馏水体积(μL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 200 800 2.0 2 2.0 150 50 1.5 3 2.0 300 300 1.0 4 1.0 320 80 0.8 5 0.8 200 200 0.4 6 0.4 200 200 0.2 7 0.2 200 200 0.1 |
标准品 液体 1mL×1 支 2-8°C保存 2 mg/mL 的葡萄糖标准品 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(μL) 蒸馏水体积(μL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2.0 75 25 1.5 2 2.0 100 100 1.0 3 1.0 80 20 0.8 4 0.8 50 50 0.4 5 0.4 50 50 0.2 6 0.2 50 50 0.1 |
| D799126 | 纤维素(CLL)含量检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8°C保存 10 mg 葡萄糖。临用前加入1 mL 蒸馏水溶解,配成10 mg/mL 葡萄糖溶液备用,2-8°C保存两周。 . 将10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078、0.0039 mg/mL的标准溶液备用。 序号 稀释前浓度(mg/ml) 标准液体积(μL) 蒸馏水体积(μL) 稀释后浓度(mg/ml) 1 10 100 900 1 2 1 50 350 0.125 3 0.125 200 200 0.0625 4 0.0625 200 200 0.03125 5 0.03125 200 200 0.015625 6 0.015625 200 200 0.0078 7 0.0078 200 200 0.0039 |
标准品 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存 2mg/mL 葡萄糖标准溶液。 2. 将2mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078、0.0039 mg/mL的标准溶液备用。 序号 稀释前浓度(mg/ml) 标准液体积(μL) 蒸馏水体积(μL) 稀释后浓度(mg/ml) 1 2 25 375 0.125 2 0.125 200 200 0.0625 3 0.0625 200 200 0.03125 4 0.03125 200 200 0.015625 5 0.015625 200 200 0.0078 6 0.0078 200 200 0.0039 |
| D799127 | 纤维素(CLL)含量检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 10 mg 葡萄糖。临用前加入1 mL 蒸馏水溶解,配成10 mg/mL 葡萄糖溶液备用,2-8℃保存2周。 3. 将10 mg/mL标准液用蒸馏水稀释为0.09、0.08、0.07、0.05、0.025、0.0125、0.00625 mg/mL的标准溶液备用。 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积ul 蒸馏水体积ul 稀释后浓度mg/mL 1 10 50 4950 0.1 |
标准品 液体1mL×1 支 2-8℃保存 2 mg/mL 葡萄糖标准品 3. 将2 mg/mL标准液用蒸馏水稀释为0.09、0.08、0.07、0.05、0.025、0.0125、0.00625 mg/mL的标准溶液备用。 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积ul 蒸馏水体积ul 稀释后浓度mg/mL 1 2 150 2850 0.1 |
| D799207 | 乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 2. 血清(浆)L-LDH 活力的计算 单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 L-LDH(U/mL)=ΔA×V样÷V样÷T×10³=66.7×x |
2. 血清(浆)L-LDH 活力的计算 单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 L-LDH(U/mL)=x×V样÷V样÷T×10³=66.7×x |
| D799323 | α-淀粉酶活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 样本处理 1. 发酵液:发酵液于 8000 rpm,4 °C,离心 15 min,取上清,作为待测样品。 2. 酶干粉:称约 1 mg,加 1 ml 缓冲液溶解,蒸馏水稀释 10 倍待测。 3. 组织样品:称约 0.1 g 组织,加入 1 ml 缓冲液,冰上充分研磨。8000 rpm,4 °C,离心 15 min,取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1. 可见分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 540 nm,蒸馏水调零。 2、将葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625 mg/mL 的标准溶液。稀释可参考下表 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 20 980 0.2 |
样本处理 1. 发酵液:发酵液于8000 rpm,4 °C,离心15 min,取上清,置冰上作为待测样品。 2. 酶干粉:称约1 mg,加1 ml缓冲液溶解,置冰上待测。 3. 组织样品:称约0.1 g组织,加入1 ml缓冲液,冰上充分研磨。8000 rpm,4 °C,离心15 min,取上清置冰上待测。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1. 可见分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 540 nm,蒸馏水调零。 2、将葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625 mg/mL的标准溶液。稀释可参考下表: 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2 100 900 0.2 |
| D799332 | β-淀粉酶活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 10mg 无水葡萄糖,临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 10 mg/mL 的标准溶液,用不完的试剂2-8℃保存2周。 2、将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/mL的标准溶液。 稀释可参考下表 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积(ul) 蒸馏水体积(ul) 稀释后浓度mg/mL 1 10 50 950 0.5 2 0.5 200 200 0.25 3 0.25 200 200 0.125 4 0.125 200 200 0.0625 5 0.0625 200 200 0.03125 |
标准品 液体1mL×1支 2-8℃保存 2 mg/mL 的葡萄糖标准品 2、将2mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/mL的标准溶液。 稀释可参考下表 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积(ul) 蒸馏水体积(ul) 稀释后浓度mg/mL 1 2 100 400 0.5 2 0.5 200 200 0.25 3 0.25 200 200 0.125 4 0.125 200 200 0.0625 5 0.0625 200 200 0.03125 |
| D799371 | 丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 3. 由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1 mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液的蛋白含量。 | 3. 由于试剂一中含有一定浓度的蛋白(约1 mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去试剂一的蛋白含量。 |
| D799399 | β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8°C保存 10 mg无水葡萄糖,临用前加入1 ml 蒸馏水溶解,配制成10 mg/ml 葡萄糖溶液备用,2-8°C可保存 2 周。 2、标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.6、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/ml。 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 100 900 1 2 1 120 80 0.6 3 1 80 120 0.4 4 1 40 160 0.2 5 1 20 180 0.1 6 1 10 190 0.05 |
标准品 液体 1 ml×1 支 2-8°C保存 2 mg/ml 葡萄糖标准品 2、标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.6、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/ml。 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2 60 140 0.6 2 2 80 320 0.4 3 0.4 200 200 0.2 4 0.2 200 200 0.1 5 0.1 200 200 0.05 |
| D799410 | 海藻糖酶(THL)活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 含 10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入1mL蒸馏水溶解,配置成10mg/ml标准液待用,2-8℃可保存2周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,2-8℃可保存4周。 2、标准品准备:将10mg/ml标准液用蒸馏水稀释至1.2、 1、0.8、0.6、0.4mg/mL。 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 120 880 1.2 2 10 100 900 1 3 1 160 40 0.8 4 1 120 80 0.6 5 1 80 120 0.4 |
标准品 液体 1mL×1 瓶 2-8℃保存 2mg/ml的葡萄糖标准品 2、标准品准备:将2mg/ml标准液用蒸馏水稀释至1.2、1、0.8、0.6、0.4mg/mL,现用现配,标准液稀释可参照下表: 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2 60 40 1.2 2 2 150 150 1 3 1 80 20 0.8 4 1 60 40 0.6 5 1 40 60 0.4 |
| D799413 | 山梨醇脱氢酶活性检测试剂盒 紫外比色法 | 产品说明书 | 试剂二 液体 12mL×1 瓶 -20℃保存 试剂三 液体 12 mL×1 瓶 -20℃保存 试剂名称(µL) 测定管 样本 100 标准溶液 - 蒸馏水 - 试剂二 150 试剂三 150 试剂一 600 将上述试剂按顺序加入1 mL 玻璃比色皿中,加样本的同时开始计时,记录10秒时的初始吸光度A1,比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37°C(哺乳动物)或 25°C(其它物种)水浴中准确反应3分钟;迅速取出比色皿并擦干,570 nm 下比色,记录3分10秒时的吸光度A2,计算?A 测定=A2-A1。(整个实验过程要避光)。 |
试剂二 液体 12mL×1 瓶 2-8℃保存 试剂三 液体 12 mL×1 瓶 2-8℃保存 序号 稀释前浓度(µmol/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(µmol/mL) 1 10 100 900 1 2 1 180 20 0.9 3 1 160 40 0.8 4 1 140 60 0.7 5 1 120 80 0.6 6 1 100 100 0.5 7 1 80 120 0.4 8 1 60 140 0.3 试剂名称(µL) 测定管 样本 100 标准溶液 - 蒸馏水 - 试剂二 150 试剂三 150 试剂一 600 将上述试剂按顺序加入1 mL 玻璃比色皿中,加试剂一的同时开始计时,记录10秒时的初始吸光度A1,比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37°C(哺乳动物)或 25°C(其它物种)水浴中准确反应3分钟;迅速取出比色皿并擦干,570 nm 下比色,记录3分10秒时的吸光度A2,计算?A 测定=A2-A1。(整个实验过程要避光)。 |
| D799415 | 纤维素酶(CL)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 含10mg无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入1mL蒸馏水溶解,配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用,2-8℃可保存2周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积ul 蒸馏水体积ul 稀释后浓度mg/mL 1 10 100 900 1 |
标准品 液体 1mL×2支 2-8℃保存 2mg无水葡萄糖溶液 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积ul 蒸馏水体积ul 稀释后浓度mg/mL 1 2 500 500 1 |
| D799416 | 纤维素酶(CL)活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 含10mg无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入1mL蒸馏水溶解,配制成10mg/mL 葡萄糖溶液备用,2-8℃可保存两周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。 序号 稀释前浓度(mgl/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 100 900 1 2 1 160 40 0.8 3 1 120 80 0.6 4 1 80 120 0.4 5 1 40 160 0.2 6 1 20 180 0.1 7 1 0 200 0 |
标准品 液体 1mL×1支 2-8℃保存 2mg/mL的葡萄糖标准溶液 序号 稀释前浓度(mgl/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2 150 150 1 2 1 80 20 0.8 3 1 60 40 0.6 4 1 40 60 0.4 5 1 20 80 0.2 6 1 10 90 0.1 7 1 0 100 0 |
| D799425 | 酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 提取液 液体 35 mL×1 瓶 2-8°C保存 试剂一 粉剂×1 瓶 2-8°C保存 临用前加 10 mL 蒸馏水溶解。 试剂二 粉剂×1 瓶 2-8°C避光保存 临用前加入 10 mL 提取液,沸水浴搅拌溶解。 试剂三 液体 50 mL×1 瓶 2-8°C保存 试剂四 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存 标准品 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存 20 μmol/mL 标准酪氨酸。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1. 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。 2. 试剂一、试剂二和试剂三置于 40 °C水浴保温 30 min 以上。 3. 标准溶液的配制:临用前将20 μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25 μmol/mL标准溶液使用,现用现配。 4. 按操作表在ep管中依次加入各试剂 试剂名称(µL) 测定管 对照管 标准管 空白管 样本 100 100 - - 试剂一 - 200 试剂二 200 - 混匀后 40 °C水浴保温 10 min 试剂一 200 - 试剂二 - 200 混匀后 10000 rpm 4 °C离心 10 min,取上清,加入新的EP管中 上清 200 200 - - 标准品 - - 200 - 蒸馏水 - - - 200 试剂三 1000 1000 1000 1000 试剂四 200 200 200 200 混匀后 40 °C水浴保温 20 min,取 1 mL 于 1 mL 玻璃比色皿中,在 680 nm 测定光吸收,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。 活性计算 1. 按蛋白浓度计算 NP 活性单位(U)定义:每毫克蛋白每分钟水解产生 1 μmol 酪氨酸。 NP 活性(U/mg prot)=C 标准品×ΔA测定÷ΔA标准×V1÷(Cpr×V2)÷T =0.125×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr 2. 按样本质量计算 NP 活性单位(U)定义:每克样品每分钟催化水解产生 1 μmol 酪氨酸。 NP 活性(U/g)=C 标准品×ΔA测定÷ΔA标准×V1÷(W×V2÷V3)÷T =0.125×ΔA测定÷ΔA标准÷W C 标准品:0.25 μmol/mL 标准酪氨酸溶液; Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL);W:样品质量(g);V1:酶促反应总体积(mL),0.5 mL;V2 加入反应体系中粗酶液体积(mL),0.1 mL;V3粗酶液总体积(mL),1 mL;T:催化反应时间(min),10 min。 注意事项 若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。 |
试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 提取液 液体 70 mL×1 瓶 2-8°C保存 试剂一 粉剂×2 瓶 2-8°C保存 试剂二 液体 15 mL×1 瓶 2-8°C避光保存 试剂三 液体 60 mL×1 瓶 2-8°C保存 试剂四 液体 8 mL×1 瓶 2-8°C保存 试剂四工作液配制:根据样本量按试剂四:蒸馏=100μL:100μL (共0.2mL,约 1T) 的比例配制,现用现配。 试剂一助溶剂 液体 4 mL×1 瓶 2-8°C保存 标准品 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存 20 μmol/mL标准酪氨酸。 试剂一:(1) 临用前取一瓶试剂一,轻弹瓶身使粉剂落于瓶底。加入250μL提取液,充分振荡使粉剂完全浸湿并分散。(2)加入750 μL 试剂一助溶剂,充分振荡混匀。确保使用涡旋振荡或剧烈搅拌,直至形成均匀的糊状物,置于50℃水浴中保温孵育10分钟,期间取出振荡2-3次。(3) 振荡完成后,加入6.5mL提取液,充分混匀(约30T) 。(4) 随后置于沸水浴中促溶至少10min, 期间边振荡边观察试剂溶解状态。配制完成后,试剂应呈均一、不透明的胶体悬浊液。配制完成后,于2-8℃避光储存,3d内用完。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1. 分光光度计预热30 min以上,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。 2. 试剂一置于40 °C水浴保温10 min以上。 3. 标准溶液的配制:将20μmol/mL酪氨酸标准品用蒸馏水进行稀释得到0.25、0.125、0.0625、0.03125、 0.015625、0.0078125、0.0039μmol/mL标准品备用。 序号 稀释前浓度(μmol/mL) 标准品体积(μ L) 蒸馏水体积(μL) 稀释后浓度(μmol/mL ) 1 20 25 975 0.5 2 0.5 500 500 0.25 3 0.25 500 500 0.125 4 0.125 500 500 0.0625 5 0.0625 500 500 0.03125 6 0.03125 500 500 0.015625 7 0.015625 500 500 0.0078125 8 0.0078125 500 500 0.0039 4. 按操作表在ep管中依次加入各试剂 试剂名称(µL) 测定管 对照管 标准管 空白管 粗酶液 250 250 - - 试剂一 250 混匀后 40 °C水浴保温 10 min 试剂一 - 250 试剂二 250 250 混匀后 1500 rpm 4 °C离心10 min,小心吸取上清,避免吸入沉淀 上清 400 400 - - 标准品 - - 400 - 蒸馏水 - - - 400 试剂三 800 800 800 800 试剂四 200 200 200 200 混匀后40 °C水浴保温20 min,取1 mL于1 mL玻璃比色皿中,在680 nm测定光吸收,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准曲线只需测1-2次。 活性计算 1. 标准曲线的绘制 根据标准管的浓度 ( x,μmol/mL) 和吸光度△A 标准 (y,△A 标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将△A测定 (y,△A测定) 带入公式计算样本浓度 (x,μmol/mL) 2.NP 活性计算: 1、按样本蛋白浓度计算 酶活单位定义:40℃每毫克蛋白每分钟水解产生1 μg酪氨酸为一个酶活单位。 NP活性 (U/mg prot)=x×V1÷(Cpr×V2)×181.191÷T×F=54.357×x÷Cpr×F 2、按样本质量计算 酶活单位定义:40℃每克样本每分钟催化水解产生1 μg酪氨酸为一个酶活单位。 NP活性 (U/g 质量)=x×V1÷(W×V2÷V3)×181.191÷T×F=54.357×x÷W×F 181.191: 酪氨酸的摩尔质量(g/mol),用于将μmol 换算为μg(1μmol×181.191g/mol=181.191μg);Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W: 样本质量,g;V1:酶促反应总体积,0.75mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,0.25mL; V3粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min;F:样本稀释倍数。 注意事项 1、建议正式实验前先进行预实验,通过调整样本稀释倍数找到最佳测定条件。酶活性过高或样本中干扰物质较多均可能导致测定值偏低。 2、若反应较弱,△A 测定差值较小,可适当延长酶促反应时间(20-30min), 即第一步水浴时间。或增大提取时样本质量,注意同步修改计算公式。 3、由于中性蛋白酶活性极易降解,请优先使用新鲜样本,提取完成后尽快测定,并避免样本冻存或反复冻融。 |
| D799478 | 线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 试剂一 液体 40mL×1 瓶 常温保存 若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用; 试剂二 液体 10mL×2 瓶 2-8℃保存 临用前取1支试剂三加入1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;用不完的试剂2-8℃保存4周。 试剂三 粉剂×2 支 2-8℃保存 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 10mg无水葡萄糖。临用前加1mL 蒸馏水,配成 10mg/mL葡萄糖标准液,2-8℃保存两周。 |
试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 试剂一 液体 40mL×1 瓶 常温保存 若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用; 试剂二 液体 10mL×2 瓶 2-8℃保存 临用前取1支试剂三加入1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;用不完的试剂2-8℃保存4周。 试剂三 粉剂×2 支 2-8℃保存 标准品 液体1ml×1支 2-8℃保存 2mg/ml葡萄糖标准品。 |
| D799503 | 土壤蔗糖酶(S-SC)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8℃保存 含10mg无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入1mL蒸馏水溶解备用,2-8℃可保存2周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。 2、标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL。 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 100 900 1 2 1 250 250 0.5 3 1 200 300 0.4 4 1 150 350 0.3 5 1 100 400 0.2 6 1 50 450 0.1 |
标准品 液体 1mL×1 瓶 2-8℃保存 2mg/mL葡萄糖标准品 2、标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.4、0.3、0.25、0.1、0.08mg/mL。 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2 48 192 0.4 2 2 36 204 0.3 3 2 30 210 0.25 4 2 24 216 0.2 5 2 12 228 0.1 6 2 10 240 0.08 |
| D799504 | 土壤蔗糖酶(S-SC)活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8 °C保存 含10 mg无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入1 mL蒸馏水溶解备用,2-8 °C可保存2周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 10 100 900 1 2 1 100 100 0.5 3 1 80 120 0.4 4 1 60 140 0.3 5 1 40 160 0.2 6 1 20 180 0.1 |
标准品 液体 1mL×1 支 2-8 °C保存 2 mg/mL葡萄糖标准品 序号 稀释前浓度(mg/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(mg/mL) 1 2 50 150 0.5 2 2 40 160 0.4 3 2 30 170 0.3 4 2 20 180 0.2 5 2 10 190 0.1 |
| D799528 | 土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。 S-POD 活力(U /g 土样)=y×V反÷W÷T=8.16×y÷W |
单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。 S-POD 活力(U /g 土样)=x×V反÷W÷T=8.16×x÷W |
| D799533 | 土壤中性转化酶(S-NI)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 标准品 粉剂×1 支 2-8°C保存 10 mg无水葡萄糖。临用前加入1 mL 试剂一溶解,制备10 mg/mL葡萄糖标准液备用。2-8°C保存4周。 2. 标准液稀释:将 10 mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至 0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用 |
标准品 液体1ml×2支 2-8°C保存 2 mg/mL葡萄糖标准液。 2. 标准液稀释:将 2 mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至 0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用,稀释表如下: 序号 稀释前浓度mg/mL 标准液体积(ul) 试剂一体积(ul) 稀释后浓度mg/mL 1 2 500 1500 0.5 2 0.5 600 400 0.3 3 0.5 400 600 0.2 4 0.5 200 800 0.1 5 0.5 160 840 0.08 6 0.5 120 880 0.06 7 0.5 80 920 0.04 |
| D799556 | 土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)活性检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 试剂二 液体10 mL×1瓶 2-8°C保存 临用前每瓶加入 5 mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20°C保存。 试剂三 粉剂×2瓶 -20°C保存 |
试剂二 液体10 mL×1瓶 2-8°C保存 试剂三 粉剂×2瓶 -20°C保存 临用前每瓶加入 5 mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20°C保存。 |
| D799574 | 羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 标准品 液体 0.5mL×1 支 2-8℃保存 0.5mg/mL 羟脯氨酸标准品。 | 标准品 液体 1mL×1 支 2-8℃保存 0.5mg/mL 羟脯氨酸标准品。 |
| D799607 | 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-8)比色法 | 产品说明书 | 试剂三 液体100ul×1支 2-8°C保存 临用时试剂三用蒸馏水稀释50倍,按样本量现用现配。 试剂名称(µL) 测定管 对照管 样本 50 - 蒸馏水 - 50 试剂三(稀释后) 50 50 工作液 800 800 试剂四 100 100 活性计算 1、抑制百分率的计算 抑制百分率=(A对照管-A测定管) ÷A对照管× 100% |
试剂三 液体×1支 2-8°C保存 临用时试剂三用蒸馏水稀释50倍,按样本量现用现配。 试剂名称(µL) 测定管 对照管 空白管 样本 50 - - 蒸馏水 - 50 10 试剂三(稀释后) 50 50 - 工作液 800 800 800 试剂四 100 100 100 充分混匀,25°C静置 30 min 后,取 800 μl 反应液于1 ml 玻璃比色皿中测定450 nm 处各管吸光值 A。 活性计算 1、抑制百分率的计算 抑制百分率=(A对照管-A测定管) ÷(A对照管-A空白管) × 100% |
| D799608 | 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-8)微量法 | 产品说明书 | 试剂名称(µl) 测定管 对照管 样本 10 - 蒸馏水 - 10 试剂三(稀释后) 10 10 工作液 160 160 试剂四 20 20 充分混匀,室温静置30 min 后,450 nm处测定各管吸光值 A。对照管只需测1-2次。 活性计算 1、抑制百分率的计算 抑制百分率=(A对照管-A测定管) ÷A对照管× 100% 尽量使样本的抑制百分率在 20-80%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于20%或大于80%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需将样本用提取液适当稀释;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本。 |
试剂名称(µl) 测定管 对照管 空白管 上清液 10 - - 蒸馏水 - 10 20 试剂三(稀释后) 10 10 - 工作液 160 160 160 试剂四 20 20 20 充分混匀,室温静置30 min 后,450 nm处测定各管吸光值A。空白管和对照管只需做1-2次。 活性计算 1、抑制百分率的计算 抑制百分率=(A对照管-A测定管) ÷(A对照管-A空白管)× 100% 尽量使样本的抑制百分率小于75%。如果计算出来的抑制百分率大于75%,则需将样品用提取液适当稀释。 |
| D799615 | 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 试剂六 液体 40µL×1 支 2-8℃保存 先将试剂六内液体离心至底部再用移液枪吹打混匀使用。临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按 1:20(V:V)的比例配制备用,现用现配; 标准品 粉剂 10mg×1 支 2-8℃保存 将标准品用1mL蒸馏水溶解2-8℃保存,浓度为10mg/mL,2-8℃保存4周。3、标准品的稀释:吸取10mg/mL标准溶液,用蒸馏水稀释至50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL、3.125μg/mL、1.5625μg/mL。 4、标准品稀释表: 序号 稀释前浓度μg/mL 标准品体积ul 蒸馏水体积ul 稀释后浓度μg/mL 1 10000(10μg/mL) 100 900 1000 2 1000 50 950 50 3 50 500 500 25 4 25 500 500 12.5 5 12.5 500 500 6.25 6 6.25 500 500 3.125 7 3.125 500 500 1.5625 5、按操作表依次加入各试剂 试剂名称(µL) 测定管 标准管 空白管 样本 100 - - 标准品 - 100 - 蒸馏水 - - 100 试剂二 2 2 2 混匀37℃孵育 30分钟后继续加入下列试剂,此步骤需在EP管中反应,禁止使用比色皿反应 试剂三 700 700 700 试剂四 100 100 100 试剂五 100 100 100 试剂六工作液 10 10 10 加入试剂六工作液的同时开始计时,迅速混匀,测定412nm处30s和150s光吸收A1测定、A1标准、A1空白和A2 测定、A2标准、A2空白,计算ΔA测定=A2测定-A1测定,ΔA 标准=A2标准 - A1标准,ΔA空白=A2空白 - A1空白,空白管和标准曲线只需做1-2次。 1. 绘制标准曲线: 以标准管的浓度(μg/mL)为横坐标 x,以(ΔA 标准-ΔA 空白)为纵坐标 y,绘制标准曲线。根据标准曲线, 将(ΔA 测定-ΔA 空白)带入公式计算样本浓度(μg/mL) 2. 按蛋白浓度计算:GSSG(μg/mg prot)=x×V 样÷ (V 样×Cpr )=x÷Cpr 3. 按样本质量计算:GSSG(μg/g 质量)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=x÷W 4. 按细胞数量计算:GSSG(μg/106 cell)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×N)=x÷N 5. 按液体体积计算:GSSG(μg/mL)=2x V 样总:上清液总体积,1mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1mL;W:样本质量,g;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;N:细胞数量,以 106为单位计量;2:血浆(血细胞)稀释一倍。 1、样本处理需匀浆完全,若当天不能完成测量,可放-80℃保存。 2、若不确定样本中GSSG含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。 3、此方法利用酶促反应速率计算底物浓度,尽量准确在30秒和150秒处完成读数。 4、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 5、如果样本量过多,可将试剂三与试剂六按照比例混匀配成工作液,在最后一步加入,加入工作液即开始计时。用多少配多少。 6、因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量,需另取组织。 7、最低检出限:1.369 μg/mL 8、线性范围:1.5625-50 μg/mL |
试剂六 液体 20µL×1 支 2-8℃保存 先将试剂六内液体离心至底部再用移液枪吹打混匀使用。临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按 1uL:40uL的比例配制备用,现用现配; 标准品 粉剂 ×1 支 2-8℃保存 临用前加入1.63mL蒸馏水,充分溶解,浓度为10mmol/L,2-8℃保存4周。 工作液:根据样本量按试剂三:试剂六工作液=700ul:10ul比例配制,现用现配。 3、标准品的稀释:吸取10mmol/L标准溶液,用试剂一稀释至40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L。 4、标准品稀释表: 序号 稀释前浓度μmol/L 标准品体积ul 试剂一体积ul 稀释后浓度μmol/L 1 10000(10mmol/L) 40 960 400 2 400 50 950 20 3 20 500 500 10 4 10 500 500 5 5 5 500 500 2.5 5、按操作表依次加入各试剂 试剂名称(µL) 测定管 标准管 空白管 样本 100 - - 标准品 - 100 - 蒸馏水 - - 100 试剂二 2 2 2 混匀37℃孵育 30分钟后继续加入下列试剂,此步骤需在EP管中反应,禁止使用比色皿反应 工作液 710 710 710 试剂四 100 100 100 充分混匀,25℃避光孵育2min 试剂五 100 100 100 混匀,25℃避光孵育,准确测定5min时个孔吸光值,A测定、A标准、A空白,计算ΔA测定=A测定-A空白,ΔA 标准=A标准 - A空白,空白管和标准曲线只需做1-2次。 1. 绘制标准曲线: 以标准管的浓度(μmol/L)为横坐标 x,以ΔA 标准为纵坐标 y,绘制标准曲线。根据标准曲线, 将ΔA 测定带入公式计算样本浓度(μmol/L) 2. 按蛋白浓度计算:GSSG(μmol/mg prot)=x×V 样÷ (V 样×Cpr )×F÷1000=x÷Cpr×F÷1000 3. 按样本质量计算:GSSG(μmol/g 质量)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×F÷1000=x÷W×F÷1000 4. 按细胞数量计算:GSSG(μmol/106 cell)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×N)×F÷1000=x÷N×F÷1000 5. 按液体体积计算:GSSG(μmol/mL)=2x×F÷1000 V 样总:上清液总体积,1mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1mL;W:样本质量,g;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;N:细胞数量,以 106为单位计量;2:血浆(血细胞)稀释一倍;1000:单位换算系数,1mL=10-3L; F:稀释倍数。 注意事项 1、样本代谢较快,为确保准确性,完成收集后,尽快用试剂一对样本进行处理。 2、若不确定样本中GSSG含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。 3、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 4、因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量,需另取组织。 |
| D799616 | 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒 微量法 | 产品说明书 | 试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 试剂一 液体 110 ml×1 瓶 2-8°C保存 试剂二 液体 130 µl×1 支 2-8°C保存 有毒易挥发试剂,涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。 试剂三 液体 20 ml×1 瓶 2-8°C保存 试剂四 液体 2.5 ml×1 瓶 2-8°C保存 试剂五 粉剂 ×1 瓶 2-8°C保存 用前2.5 ml蒸馏水溶解。溶解后-20°C分装保存4周,避免反复冻融。 试剂六 液体 12.5 µl×1 支 2-8°C保存 临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按1:20(V:V)的比例配制备用,现用现配; 标准品 粉剂 10 mg×1 支 2-8°C保存 将标准品用1 ml蒸馏水溶解,浓度10mg/ml,2-8°C保存4周。 需要而未提供的试剂和器材 分析天平、匀浆器/研钵、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。 样本处理 1、组织处理 新鲜组织首先用PBS冲洗2次,然后称取动物组织或者植物组织0.1 g。加入用试剂一润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷);然后加入1 ml试剂一(组织/试剂一比例保持不变即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);12000g ,4°C离心10 min;取上清液放置于4°C待测,若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存3天)。 2、血液处理 血浆:将收集的抗凝血于4°C,600 g离心10分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等体积的试剂一,沸水浴5min(缠封口膜,放置爆盖),4°C,12000 g 离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4°C待测,若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存 3 天)。 血细胞:将收集的抗凝血于4°C,600g 离心10分钟,弃去上层血浆用3倍体积的 PBS 清洗3次(用PBS重悬血细胞,600 g 离心10分钟),加入等体积试剂一,沸水浴5min (缠封口膜,放置爆盖),4°C,12000 g 离心10 分钟,吸取上清放于 4°C待测,若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存 3 天)。 3、细胞处理 收集不少于500万个细胞,首先用 PBS 清洗细胞 2 次(PBS 重悬细胞,600 g 离心 10 分钟),加入1 ml试剂一重悬细胞,反复冻融 2-3 次(可在液氮中冻结,37°C水浴中溶解)或者进行超声(200 W,超3 s,停10 s,重复30次),12000 g,4°C离心10 分钟,收集上清于冰上待测,若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存3 天)。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1、分光光度计或酶标仪预热 30 min以上,调节波长至 412 nm,分光光度计蒸馏水调零。 2、试剂三放置 37°C水浴中保温 30 min。 3、标准品的稀释:吸取 10 mg/ml 标准溶液,用蒸馏水稀释至 125 μg/ml、62.5 μg/ml、31.25 μg/ml、15.625 μg/ml、7.8125 μg/ml、3.90625 μg/ml。 4、标准品稀释表: 序号 稀释前浓度μg/mL 标准品体积ul 蒸馏水体积ul 稀释后浓度μg/mL 1 10000(10μg/mL) 100 900 1000 2 1000 125 875 125 3 125 100 100 62.5 4 62.5 100 100 31.25 5 31.25 100 100 15.625 6 15.625 100 100 7.8125 7 7.8125 100 100 3.90625 5、按操作表依次加入各试剂 试剂名称(µl) 测定管 标准管 空白管 样本 20 - - 标准品 - 20 - 蒸馏水 - - 20 试剂二 1 1 1 混匀后 37°C孵育 30分钟 试剂三 140 140 140 试剂四 20 20 20 试剂五 20 20 20 试剂六 2 2 2 加入试剂六的同时开始计时,迅速混匀,测定 412 nm 处 30 s 和 150 s 光吸收 A1 测定(A1 标准、A1 空白)和 A2 测定(A2 标准、A2 空白),计算 ΔA 测定=A2 测定 - A1 测定,ΔA 标准=A2 标准 - A1 标准,ΔA 空白=A2 空白 - A1 空白,空白管和标准曲线只需做 1-2 次。 注:试剂二对96孔板有腐蚀性,所以第一步37℃孵育勿加到96孔板中,可统一加到EP管混匀后转移至96孔板再进行测定。 活性计算 1. 绘制标准曲线: 以标准管的浓度(μg/ml)为横坐标 x,以(ΔA 标准-ΔA 空白)为纵坐标 y,绘制标准曲线。根据标准曲线,将(ΔA 测定-ΔA 空白)带入公式计算样本浓度(μg/ml) 2. GSSG 含量计算: (1) 按蛋白浓度计算:GSSG(μg/mg prot)=x×V 样÷ (V 样×Cpr )=x÷Cpr (2) 按样本质量计算:GSSG(μg/g 质量)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=x÷W (3) 按细胞数量计算:GSSG(μg/ 106 cell)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×N)=x÷N (4) 按液体体积计算:GSSG(μg/ml)=2x V 样总:上清液总体积,1 ml;V 样:加入反应体系中上清液体积,20 μl=0.02 ml;W:样本质量,g;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/ml;N:细胞数量,以 106单位计量;2:血浆(血细胞)稀释一倍。 注意事项 1、样本处理需匀浆完全,若当天不能完成测量,可放-80°C保存。 2、若不确定样本中GSSG含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。 3、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 4、如果样本量过多,可将试剂三与试剂六按照比例混匀配成工作液,在最后一步加入,加入工作液即开始计时。用多少配多少。 5、因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量,需另取组织。 6、最低检出限:3.211 μg/ml 7、线性范围:3.9-125 μg/ml |
试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 试剂一 液体 110 ml×1 瓶 2-8°C保存 试剂二 液体 130 µl×1 支 2-8°C保存 有毒易挥发试剂,涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。 试剂三 液体 20 ml×1 瓶 2-8°C保存 试剂四 液体 2.5 ml×1 瓶 2-8°C保存 试剂五 粉剂 ×1 瓶 2-8°C保存 用前2.5 ml蒸馏水溶解。溶解后-20°C分装保存4周,避免反复冻融。 试剂六 液体 12.5 µl×1 支 2-8°C保存 先将试剂六内液体离心至底部再用移液枪吹打混匀使用。临用前根据样本数量按照试剂六:蒸馏水=1μL:40μL(41μL,约20T)的比例配制备用,现用现配。 标准品 粉剂 ×1瓶 2-8°C保存 10mg氧化型谷胱甘肽。临用前加入1.63mL 蒸馏水,充分溶解,浓度为10mmol/L,2-8℃可保存4周。 工作液的配制:根据样本量按照试剂三:试剂六工作液=140μL:2μL(142μL,1T) 的比例配制工作液,现用现配。 需要而未提供的试剂和器材 分析天平、匀浆器/研钵、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。 样本处理 1、组织处理 按照组织质量(g): 试剂一体积 (mL) 为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL试剂一) 进行冰浴匀浆(匀浆器/研钵提前放冰上预冷)。12000g, 4℃离心10min, 取上清液放置于4℃待测。若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存3天)。 2、血液处理 血浆:将收集的抗凝血于4°C,600 g离心10分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等体积的试剂一,沸水浴5min(缠封口膜,放置爆盖),4°C,12000 g 离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4°C待测,若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存 3 天)。 血细胞:将收集的抗凝血于4°C,600g 离心10分钟,弃去上层血浆用3倍体积的 PBS 清洗3次(用PBS重悬血细胞,600 g 离心10分钟),加入等体积试剂一,沸水浴5min (缠封口膜,放置爆盖),4°C,12000 g 离心10 分钟,吸取上清放于 4°C待测,若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存 3 天)。 3、细菌、细胞 按照细胞数量(106个):试剂一体积(mL) 为5~10:1的比例(建议5百万细胞加入1mL 试剂一),反复冻融2-3次(可在液氮中冻结、37℃水浴中溶解)或者冰浴超声波破碎细胞(功率200w,超声3s,间隔10s, 重复30次),12000g,4℃离心10分钟,取上清置于冰上待测。若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存3天)。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1、分光光度计或酶标仪预热 30 min以上,调节波长至 412 nm,分光光度计蒸馏水调零。 2、试剂三平衡至37°C。 3、标准品的稀释:吸取10mmol/L标准品,用试剂一稀释至50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L、6.25μmol/L、3.125μmol/L。 4、标准品稀释表: 序号 稀释前浓度μmol/L 标准品体积ul 试剂一体积ul 稀释后浓度μmol/L 1 10000(即10mmol/L) 50 950 500 2 500 100 900 50 3 50 500 500 25 4 25 500 500 12.5 5 12.5 500 500 6.25 6 6.25 500 500 3.125 4、按操作表依次加入各试剂(在微量玻璃比色皿/1.5mLEP管内加入下列试剂,勿用96孔板加样) 注意:1. 工作液临用前需平衡至37℃。 2. 本实验对测定时间有严格限制,建议反应完成后尽快测定,若样本量较大,请分批测定,避免单次测定样本过多导致结果偏差。 试剂名称(µl) 测定管 标准管 空白管 样本 50 - 标准品 - 50 - 蒸馏水 - - 50 试剂二 1 1 1 充分混匀(通风橱操作),37℃孵育30分钟后,取20μL反应液于微量比色皿/96孔板中继续加入下列试剂 上述反应液 20 20 20 工作液 140 140 140 试剂四 20 20 20 充分混匀,25℃避光孵育2min 试剂五 20 20 20 充分混匀,于25℃避光孵育,准确测定5min时各孔吸光值,分别记为A测定、A标准、A空白,计算△A测定=A测定-A空白,△A标准=A标准-A空白。空白管和标准曲线只需做1-2次。 注:试剂二对96孔板有腐蚀性,所以第一步37℃孵育勿加到96孔板中,可统一加到EP管混匀后转移至96孔板再进行测定。 活性计算 1. 绘制标准曲线: 以标准管的浓度(μmol/L)为横坐标 x,以(ΔA标准)为纵坐标y,绘制标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定带入公式计算样本浓度x(μmol/L) 2. GSSG 含量计算: (1) 按蛋白浓度计算:GSSG 含量 (μmol/mg prot)=x×V样÷( V 样×Cpr)×F÷1000=x÷Cpr×F÷1000 (2) 按样本质量计算:GSSG含量(μmol/g 质量)=x×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×F÷1000=x÷W×F÷1000 (3) 按细胞/细菌数量计算:GSSG含量(μmol/10?cell)=x×V样÷(V样÷V样总×N)×F÷1000=x÷N×F÷1000 (4) 按液体体积计算:GSSG 含量(μmol/L)=2x×F÷1000 V样总:样本前处理上清液总体积,1mL;V样:加入反应体系中上清液体积,20 μL=0.02mL;W:样本质量,g;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;N:细胞/细菌数量,以106计;2:血浆(血细胞)稀释一倍;1000: 单位换算系数,1mL=10-3L;F:稀释倍数。 注意事项 1.样本采集过程中,GSH的代谢速率较快。为确保测定准确性,在完成样本收集后,建议尽快使用试剂一对样本进行处理。 2. 若不确定样本中GSSG含量的高低,可用试剂一稀释几个梯度后再进行测量。 3. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 4. 因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量,需另取组织。 |
| D799673 | 中性蛋白酶(NP)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 成份 数量 储存温度 使用方法 提取液 液体 50 mL×1 瓶 2-8 °C保存 内含不溶物,使用前摇匀。 试剂一 液体 50 mL×1 瓶 2-8 °C保存 试剂二 粉剂×1 支 -20 °C保存 临用前加蒸馏水 2.6 mL 充分溶解,2-8°C保存。 试剂三 液体 5 mL×1 瓶 2-8 °C保存 试剂四 粉剂×1 瓶 2-8 °C保存 临用前加入试剂一 2.6 mL 充分溶解,2-8°C保存。 |
成份 数量 储存温度 使用方法 提取液 液体 60 mL×1 瓶 2-8 °C保存 内含不溶物,使用前摇匀。 试剂一 液体 50 mL×1 瓶 2-8 °C保存 试剂二 粉剂 ×2支 -20 °C保存 临用前取1支加蒸馏水1.5 mL充分溶解,2-8°C可保存2周。 试剂三 液体 6 mL×1 瓶 2-8 °C保存 试剂四 液体 3 mL×1 瓶 2-8 °C保存 |
| D799675 | 碱性蛋白酶(AKP)活性检测试剂盒 比色法 | 产品说明书 | 试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 提取液 液体 35mL×1 瓶 2-8℃保存 试剂一 粉剂×1 瓶 2-8℃保存 临用前加 10 mL 蒸馏水溶解。 试剂二 粉剂×1 瓶 2-8℃避光保存 临用前加入 10 mL 提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。 试剂三 液体 50ml×1 瓶 2-8℃保存 试剂四 液体 10mL×1 瓶 2-8℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 2-8℃保存 20 μmol/mL 标准酪氨酸溶液。 需要而未提供的试剂和器材 研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。 样本处理 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心 10min,取上清液,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取 0.1g 酶制品,加入 1mL 提取液,置冰上待测。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。 2、试剂一、试剂二和试剂三置于 40℃水浴保温 30min 以上。 3、标准溶液的配制:临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用,现用现配。 4、按操作表依次加入各试剂 试剂名称(µL) 测定管 对照管 标准管 空白管 样本 100 100 - - 试剂一 - 200 试剂二 200 - 混匀后 40℃水浴保温 10min 试剂一 200 - 试剂二 - 200 混匀后 10000rpm 4℃离心 10min,取上清,加入新的EP管中 上清 200 200 - - 标准品 - - 200 - 蒸馏水 - - - 200 试剂三 1000 1000 1000 1000 试剂四 200 200 200 200 混匀后 40℃水浴保温 20min,取1mL于1mL玻璃比色皿中,于680nm测定光吸收,分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。并计算ΔA测定=A测定管-A对照管、ΔA标准=A标准管-A空白管。 活性计算 1、按蛋白浓度计算 酶活单位定义:每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1 μmol 酪氨酸为一个酶活单位。 AKP 活性(U/mg prot)=C 标准品×ΔA 测定÷ΔA 标准×V1÷(Cpr×V2)÷T =0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr 2、按样本质量计算 酶活单位定义:每克样本每分钟催化水解产生 1 μmol 酪氨酸为一个酶活单位。 AKP 活性(U/g 质量)=C 标准品×ΔA 测定÷ΔA 标准×V1÷(W×V2÷V3)÷T =0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W C 标准品:0.25 μmol/mL 标准酪氨酸溶液; Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; V1:酶 促反应总体积,0.5mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,0.1 mL;V3:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间, 10min。 注意事项 若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。 |
试剂盒组分 成份 数量 储存温度 使用方法 提取液 液体 60mL×1 瓶 2-8℃保存 试剂一 粉剂×2 瓶 2-8℃保存 试剂二 液体 15ml×1 瓶 2-8℃保存 临用前加入 10 mL 提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。 试剂三 液体 60ml×1 瓶 2-8℃保存 试剂四 液体 8mL×1 瓶 2-8℃保存 试剂四工作液配制:根据样本量按试剂四:蒸馏水=100μL:100μL(共0.2mL,约1T)比例配制,现用现配。 试剂一助溶剂 液体 4mL×1 瓶 2-8℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 2-8℃保存 20 μmol/mL酪氨酸标准溶液。 注:试剂一:(1)临用前取一瓶试剂一,轻弹瓶身使粉剂落于瓶底。加入250μL提取液,充分振荡使粉剂完全浸 湿并分散。(2)加入750 μL试剂一助溶剂,充分振荡混匀;确保使用涡旋振荡或剧烈搅拌,直至形成均匀的糊状物。(3)置于50℃水浴中保温孵育10分钟,期间取出振荡2-3次。(4)振荡完成后,加入6.5mL提取液,充分混匀(约30T)。随后置于沸水浴中促溶(至少10min), 期间边振荡边观察试剂溶解状态。(5)配制完成后,试剂应呈均一、不透明的胶体悬浊液。配制完成后,于2-8℃避光储存,3d内用完。 需要而未提供的试剂和器材 研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。 样本处理 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆,10000rpm 4℃离心 10min,取上清液,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取 0.1g 酶制品,加入 1mL 提取液,置冰上待测。 注:本试剂盒提取液未添加酶特异性激活剂。若酶制品需要特定激活剂,请根据酶的产品资料,在必要时自行补加所需的激活成分。 操作步骤 ※正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。 2、试剂一置于40℃水浴保温10min 以上。 3、标准溶液的配制:将20μmol/mL酪氨酸标准液用蒸馏水进行稀释得到0.25、0.125、0.0625、0.03125、 0.015625、0.0078125、0.0039μmol/mL标准溶液备用 序号 稀释前浓度(μmol/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(μmol/mL) 1 20 25 975 0.5 2 0.5 500 500 0.25 3 0.25 500 500 0.125 4 0.125 500 500 0.0625 5 0.0625 500 500 0.03125 6 0.03125 500 500 0.015625 7 0.015625 500 500 0.0078125 8 0.0078125 500 500 0.0039 4、按操作表依次加入各试剂 试剂名称(µL) 测定管 对照管 标准管 空白管 粗酶液 250 250 试剂一 250 - 充分混匀后40℃水浴保温10min 试剂一 250 试剂二 250 250 混匀后10000rpm 4℃离心10min,小心吸取上清,避免吸入沉淀 上清 400 400 - - 标准品 400 - 蒸馏水 - - 400 试剂三 800 800 800 800 试剂四工作液 200 200 200 200 充分混匀后40℃水浴保温20min。取1mL反应液于1mL玻璃比色皿,于680nm测定光吸收,分别记为A对照 管、A测定管、A空白管、A标准管。并计算△A测定=A测定管-A对照管、△A标准=A标准管-A空白管。空白管 和标准曲线只需做1-2次。 活性计算 1. 标准曲线的绘制 根据标准管的浓度 (x,μmol/mL) 和吸光度△A 标准 (y,△A 标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将△A测定 (y,△A测定)带入公式计算样本浓度 (x,μmol/mL) 2.AKP 活性计算: 1、按样本蛋白浓度计算 酶活单位定义:40℃每毫克蛋白每分钟水解产生1 μg酪氨酸为一个酶活单位。 AKP活性 (U/mg prot)=x×V1÷(Cpr×V2)×181.191÷T×F=54.357×x÷Cpr×F 2、按样本质量计算 酶活单位定义:40℃每克样本每分钟催化水解产生1 μg酪氨酸为一个酶活单位。 AKP活性 (U/g 质量)=x×V1÷(W×V2÷V3)×181.191÷T×F=54.357×x÷W×F 181.191:酪氨酸的摩尔质量(g/mol), 用于将μmol换算为μg(1μmol×181.191g/mol=181.191μg);Cpr: 粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V1:酶促反应总体积,0.75mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,0.25mL;V3粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min;F:样本稀释倍数。 注意事项 1、建议正式实验前先进行预实验,通过调整样本稀释倍数找到最佳测定条件。酶活性过高或样本中干扰物质较多均可能导致测定值偏低。 2、若反应较弱,△A测定差值较小,可适当延长酶促反应时间(20-30min), 即第一步水浴时间。或增大提取时样本质量,注意同步修改计算公式。 3、由于碱性蛋白酶活性易降解,请优先使用新鲜样本,提取完成后尽快测定,并避免样本冻存或反复冻融。 |
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检测方法 微量法 |
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2026年10月10日 星期六