复杂序列测序

发夹结构、高GC、重复序列、ITR 序列及Poly（A/T）等难度序列在测序过程中很难测通，在测序过程中很容易出现无信号、重叠峰的现象，同时也会出现即使双端 测序仍无法测通的情况，为此，生工生物成立了针对复杂序列测序的专项服务团队。利用多项独创的技术可以对难度序列进行准确测序，有效改善难度序列难以测通的 情况。

我们的优势

复杂序列测序技术：博士领衔的专项研发团队，分别针对发夹结构、高GC、ITR和Poly（A/T）等普通测序方法难以解决的复杂 序列进行技术攻坚，使用独特的技术解决方案大幅提高了复杂序列的测序成功率；
专项服务团队：以方案设计为核心，成立专项服务团队，从序列分析开始，制定最优化的测序方案，通过多套专属测序模板制备、测序反应流程的组合，最终交付给客户最理想的测序结果。

订购信息

腺相关病毒（Adeno-associated Virus，AAV）载体是以AAV基因组为骨架改造而来的基因递送工具。腺相关病毒属于细小病毒科的低致病性病毒，其两端为末端反向重复序列（Inverted Terminal Repeat，ITR）。ITRs对于病毒的复制和包装具有决定性作用。但ITRs中GC含量高，且具有回文性质，AAV质粒容易发生突变，普通测序难以测通。生工生物独创的技术可以对ITR结果进行准确测序，并帮助评估ITR区域是否发生突变以及ITR区域的完整性。

项目名称	样本类型	技术/设备平台	交付周期（工作日）	交付结果
ITR测序	质粒、菌样	3730XL测序仪	10~15	ab1 格式的峰型彩图 seq 格式的序列文件

案例展示

送样要求

质粒

样本量>=20 μl（每增加一个反应增加5 μl），样本浓度>=200 ng/μl，纯度 OD_260/280≥1.8且OD_260/230≥1.8；
测序引物要求：扩增及测序引物距ITR结构200 bp以内，最优范围在80-200 bp；如需委托生工生物设计合成测序引物，需提供质粒全序列；
质粒4°C冷藏运输，干粉质粒可常温运输。

订购方式

下载 ITR测序订购单 ，填写后发送至 itrseq@sangon.com，由订单中心技术人员处理您的价。
订单中心电话：400-821-0268按键 2 后再按键 8

随着对基础生物功能认识以及人类健康水平的提高，基因治疗手段及RNA疫苗将基于mRNA的研究推上新的浪潮。真核生物中，几乎每条mRNA的尾部都会带有多聚腺苷酸，即Poly(A)。Poly(A)尾在翻译和控制mRNA稳定性中具有重要作用，但Poly(A/T)的测序依旧面临巨大挑战。
生工生物研发人员通过分析滑动产生的机制，最终制定出可以有效改善滑动产生的方法。常规情况下，该方法能够将滑动由几十nt缩小并固定在±3 nt以内，同时极大地提高主条带的扩增比例，使得Poly结构后的第一个碱基峰值绝对显著，从而达到单端测序便可判断Poly结构长度的效果。

项目名称	样本类型	技术/设备平台	交付周期（工作日）	交付结果
Poly(A/T)测序	质粒	3730XL测序仪	咨询	ab1 格式的峰型彩图 seq 格式的序列文件

案例展示

连续Poly (A/T)测序（116 nt）

用常规方法检测该Poly序列产生了前后各10 nt以上的滑动，即便加上正向引物的测序结果也无法判断拼接的位置。但生工生物新方法能够主条带比例显著放大，从而判断出Poly序列后第一个碱基的位置（★），从而确定Poly序列中重复碱基的数目。

不连续重复（30+74 nt）

对于不连续的重复序列测序，同样存在因Poly后第一个碱基位置无法确定而导致正反向测序结果拼接失败的现象。该方法能降低滑动底峰的同时实现仅正向引物便可确定重复碱基数目，而辅以反向测序结果能够精准判断。★Poly序列后第一个碱基。空白处对序列进行了隐藏。

送样要求

样本类型：质粒
样本浓度>=150 ng/μl，体积>=20 μl，以Nanodrop仪器为准，OD_260/280>=1.8且OD_260/230>=1.8；
引物要求：距离Poly结构200 bp以内，最优为80-200 bp；
需注明载体全称和插入目的片段长度及测序要求；
如有可能，同时提供200 μl含有相应质粒的菌液备用；
4°C冷藏运输。

订购方式

特别提示：订购复杂序列测序，需在DNA测序订购表的对应列上勾选复杂序列类型，并在底部勾选“按复杂序列订购”，以获取项目报价。 点此查看指导说明

除ITR结构、Ploy(A/T)结构等应用场景明确的复杂序列外。其他由于发夹结构、高GC含量及重复序列等因素的影响，常规的测序对于复杂序列的测序效果往往不是很理想。常规测序中常出现无信号的、重叠峰等情况。生工生物独创的技术可以对复杂序列进行测序，有效改善常规测序难以测通复杂序列的情况，大幅度提高复杂序列测序的成功率。

项目名称	样本类型	技术/设备平台	交付周期（工作日）	交付结果
Poly(C/G)测序	质粒	3730XL测序仪	咨询	ab1 格式的峰型彩图 seq 格式的序列文件
高GC	质粒

复杂序列类型及判定标准

类型	Poly(C/G)	高GC
判定标准	局部包含连续超过6 nt的C/G序列	总GC含量超过70%或者局部 （>50 nt）超过85%
案例说明	查看	查看

送样要求

样本类型：质粒
样本浓度>=150 ng/μl，体积>=20 μl，以Nanodrop仪器为准，OD_260/280>=1.8且OD_260/230>=1.8；
引物要求：距离Poly结构200 bp以内，最优为80-200 bp；
需注明载体全称和插入目的片段长度及测序要求；
如有可能，同时提供200 μl含有相应质粒的菌液备用；
4°C冷藏运输。

订购方式

特别提示：订购复杂序列测序，需在DNA测序订购表的对应列上勾选复杂序列类型，并在底部勾选“按复杂序列订购”，以获取项目报价。 点此查看指导说明