概述

Themo Scientific EpiJET 5-hmC 和5-mC分析试剂盒包含三种高级酶：T4 噬菌体β-葡糖基转移酶(T4 BGT)、Epi MspI 和 Epi HpaII。Epi MspI 和 Epi HpaII 是对 CCGG 位点的内部胞嘧啶甲基化具有不同敏感性的同裂酶。当胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶 (5-mC) 或5-羟甲基胞嘧啶 (5-hmC) 位于识别序列内时，Epi MspI 可完全酶切基因组 DNA，但当5-hmC 葡糖基化时，其活性被完全阻断。Epi HpaII 仅切割未修饰的 CCGG 位点。
该试剂盒利用 T4 BGT 能力，通过向5-hmC 添加葡萄糖基团，提高限制性内切酶 Epi MspI 对葡糖基化5-hmC 的敏感性，对5-hmC 残基进行特异性修饰。T4 BGT 配制后可在15分钟内完成5-hmC 的高度特异性、完整和快速葡糖基化。
分析包括使用 Epi MspI 和 Epi HpaII 进行 DNA 样品葡糖基化和后续限制性酶切。然后用qPCR对限制性消化产物进行分析，其引物对位于CCGG位点两侧。
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