概述

Rosetta(DE3) 是在大肠杆菌 BL21(DE3) 基础上携带额外质粒所得衍生菌株。该质粒含有一个氯霉素抗性基因且可转录产生识别6种大肠杆菌的稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)的 tRNA (这些 tRNA 是由它们天然的启动子驱动转录的)，因此 Rosetta(DE3) 能够大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平。同时，Rosetta(DE3) 的染色体上整合了λ噬菌体 DE3 区( DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶)，受到 lacUV5 启动子控制，外源添加 IPTG 可以诱导该菌株中 T7 RNA 聚合酶的快速表达。T7 RNA 聚合酶进而识别表达质粒载体上的 T7 启动子(例如 pET 系列, pGEX, pMAL 等质粒)，从而驱动重组蛋白的高效表达。经 pUC19 质粒转化检测， Rosetta(DE3) 感受态细胞的转化效率可达10^7 cfu/μg DNA。

特点

• Rosetta(DE3) 能够大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平。

使用说明

1. 从-80°C冰箱内取出E.coli Rosetta(DE3) Competent Cells，迅速插入冰盒内，使其溶解。2. 加入 DNA 样品轻轻混匀，冰中放置30分钟。3. 42°C水浴热激45秒，迅速放回冰中放置2分钟左右，注意不要晃动。添加700 μl不含抗生素的无菌培养基，混合均匀。4. 37°C振荡培养1小时（160~225 rpm），吸取适量体积均匀涂布到含相应抗生素的LB琼脂培养基平板中。37°C正置至液体被吸收，然后倒置过夜培养。

组分

E.coli Rosetta(DE3) Competent Cells 10 x 100 μl, pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl

属性

规格	10 x 100 μl
转化效率	经 pUC19 质粒转化检测，Rosetta(DE3) 感受态细胞的转化效率可达10^7 cfu/μg DNA。
保存条件	长期储存于-80°C，可保存半年，避免反复冻融。