概述

Rosetta 2(DE3)是 BL21 的衍生菌株。将具有氯霉素抗性的 pRARE2 质粒导入 BL21(DE3)细胞中即是Rosetta 2(DE3)。pRARE2 质粒可补充大肠杆菌缺乏的 7 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和 CGG)对应的 tRNA，提高外源基因的表达水平。Rosetta 2(DE3)基因组整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶)，因而可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列、pGEX、pMAL 等系统，在 IPTG 诱导下表达重组蛋白。Rosetta 2(DE3) 也是 lon 蛋白酶和膜外蛋白酶 ompT 的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。经 pUC19 质粒转化检测，Rosetta 2(DE3) 感受态细胞的转化效率可达 10^8 cfu/μg DNA。

特点

• pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。

使用说明

1. 从-80°C冰箱内取出E.coli Rosetta 2(DE3) Competent Cells，迅速插入冰盒内，使其溶解。2. 加入 DNA 样品轻轻混匀，冰中放置30分钟。 3. 42°C水浴热激45秒，迅速放回冰中放置2分钟左右，注意不要晃动。添加700 μl不含抗生素的无菌培养基，混合均匀。4. 37°C振荡培养1小时（160~225 rpm），吸取适量体积均匀涂布到含相应抗生素的LB琼脂培养基平板中。37°C正置至液体被吸收，然后倒置过夜培养。

组分

E.coli Rosetta 2(DE3) Competent Cells ：10 x 100 μl, pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) ：10 μl

属性

规格	10 x 100 μl
转化效率	经 pUC19 质粒转化检测，Rosetta 2(DE3) 感受态细胞的转化效率可达 10^8 cfu/μg DNA。
保存条件	长期储存于-80°C，可保存半年，避免反复冻融。