概述

Exonuclease III是一种核酸外切酶，该酶作用于双链DNA，从3'-OH末端方向逐步切去单核苷酸。该酶最适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性，因此该酶难以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性对底物的消化程度随3'突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端难以被切割。这种特性可以用于生产特定方向的单链 DNA，将线性化DNA设计成为一端 为不切割末端（3'突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或5'突出端），此时Exonuclease III将仅消化一条链。Exonuclease III也有RNase H、3'-磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。

应用

1. 单向嵌套缺失 2. 定点突变 3. 单链特异性探针的制备 4. 双脱氧测序用单链底物的制备

组分

Exonuclease III (100 U/μl)；10× Exo III Buffer