常规PCR（产物带dA粘性末端）

酶+buffer分开包装

B500010 Taq DNA 聚合酶

预混液2×mix

性价比高、畅销

B532061 2X SanTaq PCR Mix 预混液，含蓝染料

进口原料、高品质

B532071 SanTaq Plus PCR Mix 预混液，不含染料

B532081 SanTaq Plus PCR Mix 预混液，含蓝染料

高保真PCR（产物为平末端）

酶+buffer分开包装

B500014 Pfu DNA 聚合酶

预混液2×mix

常规pfu mix

B532083 SanPfu PCR Mix 预混液，含蓝染料

B532073 SanPfu PCR Mix 预混液，不含染料

特殊高保真酶，扩增片段长、效率高

B639292 2×高保真PCR Mix预混液

特殊类型PCR

热启动PCR

B500015 热启动 DNA 聚合酶（酶+buffer分开包装）

B639288 2×热启动PCR预混液（不含染料）

扩增长片段

B639285 长片段 PCR 扩增试剂盒

快速PCR

B532062 2X SanTaq Fast PCR Mix 预混液，含蓝染料

直接扩增样品

B639289 直接 PCR 扩增试剂盒

高GC含量模板

B639283 高GC PCR扩增试剂盒

B532511 高GC含量模板PCR扩增试剂盒

多重PCR

B639287 2×多重PCR扩增试剂盒

等温扩增

B532455 Lamp等温扩增PCR混合液（通用型）

B639261 全基因组DNA扩增试剂盒（WGA扩增）

逆转录PCR RT-PCR

B110025 Abstart一步法RT-PCR预混液

逆转录试剂盒

长链RNA

B532435 M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒 （适合获得长链cDNA）

B532445 AMV 第一链cDNA 合成试剂盒 （更适用高GC%RNA）

miRNA

B532451 miRNA 第一链 cDNA 合成（加尾法，适合大量miRNA的统一逆转录）

B532453 miRNA 第一链 cDNA 合成（茎环法，适合少量miRNA的特异逆转录）

qPCR mix

染料法

SYBR Green不饱和染料

无ROX染料 B639271 2xSG Fast qPCR Master Mix

适用于Rotor-Gene™, DNA Engine Opticon™, Opticon™ 2, Chromo 4™ Real-Time Detector, Mastercycler® ep realplex, Smart Cycler®, Roche LightCycler® 480, Roche LightCycler® Nano, Bio-Rad CFX96, and Illumina Eco™ Corbett Rotor-gene 3000,6000, Eppendorf Realplex 2

低ROX染料 B639272 2xSG Fast qPCR Master Mix（Low Rox）

适用于Applied Biosystems 7500, Applied Biosystems 7500 Fast, Stratagene Mx3000P®, Stratagene Mx3005P™, Stratagene Mx4000™, Applied Biosystems ViiA 7 and Applied Biosystems QuantStudio™ 12K Flex，QuantStudio3，QuantStudio5.

高ROX染料 B639273 2xSG Fast qPCR Master Mix（High Rox）

适用于Applied Biosystems 5700, Applied Biosystems 7000, Applied Biosystems 7300, Applied Biosystems 7700, Applied Biosystems 7900, Applied Biosystems 7900HT, Applied Biosystems 7900 HT Fast, Applied Biosystems StepOne™ and Applied Biosystems StepOnePlus™.

更适用于miRNA B532461 miRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)

包含单独的LOW/HIGH ROX,适合所有机型，灵敏度高

逆转录与qPCR一步进行 B639277 一步法反转录荧光定量试剂盒

Eva Green饱和染料

高ROX染料 B630001 Green-2-Go 2X qPCR-ROX 预混液

适用于ABI® 7000, 7300, 7700, 7900; StepOnePlus™StepOne; Eppendorf® Realplex 4

低ROX染料 B630002 Green-2-Go 2X qPCR-Low-ROX 预混液

适用于ABI®7500; Stratagene®Mx3000, Mx3005, Mx4000

无ROX染料 B630003 Green-2-Go 2X qPCR-iCycler 预混液

适用于BioRad® iCycler®, iQ™5, MyiQ

无ROX染料 B630004 Green-2-Go 2X qPCR-S 预混液

适用于BioRad® CFX96; Roche LightCycler® 480, MJ ResearchOpticon™ and Opticon™ 2; MJ research Chromo® 4;Corbett Rotor-grene® 600, 3000; Eppendorf® Realplex 2

探针法

单重qPCR检测：

无ROX参比染料 B639274 2xTaqMan Fast qPCR Master Mix

适用于Rotor-Gene™, DNA Engine Opticon™, Opticon™ 2, Chromo 4™ Real-Time Detector, Mastercycler® ep realplex, Smart Cycler®, Roche LightCycler® 480, Roche LightCycler® Nano, Bio-Rad CFX96, and Illumina Eco™ Corbett Rotor-gene 3000,6000, Eppendorf Realplex 2

低ROX参比染料 B639275 2xTaqMan Fast qPCR Master Mix(Low Rox)

适用于Applied Biosystems 7500, Applied Biosystems 7500 Fast, Stratagene Mx3000P®, Stratagene Mx3005P™, Stratagene Mx4000™, Applied Biosystems ViiA 7 and Applied Biosystems QuantStudio™ 12K Flex，QuantStudio3，QuantStudio5.

高ROX参比染料 B639276 2xTaqMan Fast qPCR Master Mix(High Rox)

适用于Applied Biosystems 5700, Applied Biosystems 7000, Applied Biosystems 7300, Applied Biosystems 7700, Applied Biosystems 7900, Applied Biosystems 7900HT, Applied Biosystems 7900 HT Fast, Applied Biosystems StepOne™ and Applied Biosystems StepOnePlus™.

多重qPCR检测：

B630005 TaqProbe qPCR Multiplex Mastermix

适用于ABI®7000, 7300, 7500, 7700, 7900; StepOne Plus™  StepOne™; BioRad®iCycler®, iQ™5, CFX96, Opticon™2, Chromo®4; Corbett Rotor-gene®6000,3000; Stratagene®Mx3000, Mx4000; Roche LightCycler®2.0, 480

Q：PCR酶组分分开包装与mix预混液的区别？

A：分开包装是指酶、Buffer与MgCl₂分为独立三管，有时候为了提升PCR的效率或增加扩增的特异性，会对反应体系中的Mg²⁺浓度进行调节，此时使用独立包装的产品会更加方便合适，而对于常规的PCR扩增，并不需要对反应体系进行调节，使用2×Mix会更加方便、快捷。

Q：Taq酶与Pfu酶的区别：

A：Taq酶是从水生栖热菌Thermus Aquaticus中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶，其特点为：扩增效率高，扩增速度约为1 kb/min，产物带有dA粘性末端，可以连接T载体，因此适用于常规PCR检测及短片段扩增克隆。其缺点是：缺乏保真性，扩增长片段时易产生错配。

Pfu酶是在嗜热的古核生物火球菌属内发现的具有热稳定性的DNA聚合酶。其特点为：具有保真性，3-5的核酸外切酶活性能够将错配碱基切除并矫正，产物为平末端，可以连接平末端载体。其缺点是：扩增效率低，扩增速度较慢，约为600 bp/min，对长片段扩增成功率低。

如需要高保真扩增长片段，推荐使用B639292 高保真PCR mix预混液，其酶为特殊的高保真酶，兼顾了Taq酶的高扩增效率以及Pfu的高保真性。

Q：什么是热启动PCR酶？

A：常规的PCR酶虽然最适酶活温度为72°C，但是其在低温时仍会保持较高的延伸活性，此时在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合，并在PCR酶的作用下延伸。结果会导致非目标序列的扩增，影响反应的特异性。热启动PCR酶是指经过抗体、适配体或化学修饰的DNA聚合酶，这种修饰使得反应最初时PCR酶失去功能，在经过高温活化修饰脱离之后才回复活性，热启动可减少非靶序列的扩增，提高反应的特异性。

Q：可以不提取核酸，直接用样本进行PCR吗？

A：看情况而定，如果为简单样本，例如细菌菌液、单克隆等，是可以使用菌液或者挑取单克隆直接作为模板进行扩增的。但对于复杂样本，比如部分阳性菌、真菌酵母、动植物组织、环境样本等，其细胞壁难以破碎或成分中有很多PCR抑制物，直接PCR成功率很低，所以推荐提取核酸进行扩增，或者尝试使用B639289 直接PCR扩增试剂盒，该试剂盒能够耐受诸多PCR抑制物，可直接从动物组织、植物组织、血液、细胞、人的头发和口腔拭子扩增DNA。

Q：如何提升高GC含量模板的PCR成功率？

A：高GC含量模板经常出现扩增失败，主要原因在于：一方面引物可能也是高GC含量，容易产生严重的非特异性扩增，另一方面高GC含量的模板退火时容易形成高级结构，如发夹茎环等，PCR酶延伸至高级结构处受阻易导致扩增失败。针对以上问题，可以尝试以下几种解决方法：1. 使用PCR添加剂，如DMSO等；2. 采用Touch Down PCR流程，增加引物退火的正确性，3. 调节反应体系，如降低Mg²⁺浓度、引物浓度等。或者直接使用高GC PCR扩增试剂盒（B639283）。

Q：MuLV和AMV逆转录酶在合成第一链cDNA方面有什么区别？

A：MuLV来自鼠白血病逆转录酶，其最适温度为37°C，在更高温度下，MuLV不稳定，但MuLV可合成更长的产物。AMV来自禽成纤维病毒逆转录酶，AMV的热稳定性能更好，对次级结构耐受。用AMV的延伸温度可达55°C, 以消除次级结构，但在这样温度下，引物延伸反应的得率通常降低。另外，AMV具有RNA 酶H活性，能对DNA:RNA杂交体的RNA部分进行内切降解。因此，若逆转录比较长的片段，推荐使用MuLV，而进行一般的逆转录或RNA中的GC含量较高时，推荐使用AMV。

Q：miRNA为什么要用特殊的逆转录方法，加尾法和茎环法的原理和区别在哪里？

A：miRNA与mRNA不同，成熟的miRNA的长度只有20nt左右，非常短，使用常规的逆转录方法无法对其进行有效逆转录，也无法对其进行PCR，因此必须通过特殊方法进行逆转录，目前主流的miRNA逆转录方法分为加尾法还是茎环法，它们详细的逆转录原理及特点可以参见资料：加尾法 茎环法

Q：染料法荧光定量PCR中的染料是什么？

A：染料法荧光定量PCR中的染料是核酸嵌合染料，它们的特性是在结合核酸的情况下，通过激发能够发出特定波长的荧光，而不结合核酸的几乎不发光，因此可以用此类染料对PCR产物的量进行实时监控。常用的染料为SYBR Green I、LC Green、Eva Green等。

Q：饱和染料与不饱和染料的区别在哪里？

A：某些嵌合染料，如SYBR Green I，当其浓度过高时，会对PCR产生明显的抑制作用，在配制qPCR体系中，该染料浓度较低，染料不能完全占据DNA产物双链上的所有的位置，因此称为“不饱和染料”。而另外一些嵌合染料如Eva Green等，高浓度时也不会对PCR产生抑制，在配制qPCR体系中，这种染料浓度很高，染料可以完全占据DNA产物双链上的所有的位置，因此称为“饱和染料”。

在应用方面，常规的荧光定量PCR使用不饱和染料即可达到要求，但是对于某些精细的分型实验如高分辨率熔解曲线（HRM），只有使用饱和染料，才能确保精确检测产物的解链情况。

Q：ROX参比染料的作用是什么？

A：在某些荧光定量平台上（如ABI、Agilent等），可以通过特殊手段，对反应管中液体量差异或者由于泡沫/蒸发导致的荧光值偏差进行校正，这种手段就是添加ROX参比染料。ROX一般预混在qPCR Mix中，但是其不参与PCR反应，当反应液体量添加不一致或PCR过程中产生蒸发时，会导致该管中的目的基因荧光值产生变化，相应的，ROX荧光也会产生变化，从而仪器能够根据ROX的荧光值变化对目的基因的荧光值进行校正。

当然，在良好操作的前提下，不使用ROX也是可以得到很标准的结果的，所以即使在ABI、Agilent等支持ROX校正的qPCR平台，也可以不适用ROX校正，在仪器设置界面，将ROX校正勾选掉即可。

Q: qPCR mix都适用于哪些仪器？

不同的qPCR mix适用仪器表如下，要注意，适用机型中只列举了常用的型号，若您的仪器型号不在此表中，可以联系技术支持为您推荐合适的qPCR mix。