体外诊断qPCR引物及探针
作为分子诊断qPCR试剂盒中的核心原料， qPCR引物及探针的质量对于样本靶标检测的准确性，起到了极其关键的作用。而对于分子诊断的应用，对引物及探针的纯度、荧光强度和洁净度等一系列指标提出更高的要求。我们在常规荧光探针的基础上，开发了性能更好的DBQ系列双淬灭、SF系列亲水改性、SX系列荧光增强等高级荧光探针。自以qPCR技术为基础的分子诊断应用在国内外兴起开始，生工生物即不断对生产工艺进行优化升级。目前，我们生产的引物及探针，已被国内外大量的分子诊断试剂盒生产商采用。
我们的优势
订购信息
IVD qPCR引物
IVD qPCR Primers
包含一对正反义链，常规情况下不带修饰。IVD专用的 qPCR引物全部在符合医药诊断级的10万级洁净车间生产及纯化，可选择多种纯化方式，推荐专门针对IVD优化的HPLC_CE (IVD)纯化。
| 纯化方式 | 碱基范围 | 交付形态 | 包装形式 | 额外QC | 合成周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| HPLC HPLC_CE (IVD)* | 11~59 mer | 干粉 液体 |
管装 96孔板 384孔板 |
纯度（CE） | 3~5工作日 |
备注：
*HPLC_CE (IVD)为推荐纯化方式，如需考虑成本，也可考虑ULTRAPAGE及标准HPLC纯化方式，如对引物纯度要求更高，则可选择2X HPLC纯化方式。选择这些纯化方式的引物均保证在符合医药诊断级的标准的10万级洁净车间内生产；
**如引物长度在碱基范围之外，请在订购前与技术支持进行咨询沟通。
IVD qPCR探针
IVD qPCR Probe
通常为一条双端分别修饰荧光和淬灭基团的单链DNA，其中也包含具有双重淬灭保障的双淬灭荧光探针。我们更是在常规荧光探针的基础上，开发了性能更好的DBQ系列双淬灭、SF系列亲水改性、SX系列超级荧光等高级荧光探针。IVD专用的 qPCR引物全部在符合医药诊断级的10万级洁净车间生产及纯化，推荐专门针对IVD优化的HPLC_CE (IVD)纯化，可在保证纯度的基础上有效避免外源性污染。
探针修饰方式及基团说明请查看IVD qPCR探针修饰基团说明
| 纯化方式 | 碱基范围 | 交付形态 | 包装形式 | 额外QC | 合成周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| HPLC HPLC_CE (IVD)* | 11~40 mer | 干粉 液体 |
管装 96孔板 384孔板 |
纯度（CE） | ≤5工作日 |
备注：
*HPLC_CE (IVD)为推荐纯化方式，如需考虑成本，也可考虑标准HPLC纯化方式，如对引物纯度要求更高，则可选择2X HPLC。选择这些纯化方式的引物均保证按医药诊断级的标准在10万级洁净车间安排生产；
**如引物长度在碱基范围之外，请在订购前与技术支持进行咨询沟通。
IVD qPCR 常规双端修饰荧光探针
| 探针类型 | 淬灭修饰基团 | 荧光修饰基团 | 特点 |
|---|---|---|---|
| BHQ系列荧光探针 | BHQ1/BHQ2/BHQ3 | 点击查看 IVD qPCR探针修饰基团说明 |
吸收光谱范围广，从430nm-730nm，通过BHQ1/BHQ2/BHQ3同系列三个淬灭基团，可搭配大多数的荧光基团，适用于多种检测 |
| MGB荧光探针 | MGB | 和传统探针比，相同长度的序列，可增加约10°C的Tm值，并稳定探针与靶标的复合物。因此，MGB探针明显短于传统探针，并且具有更好的检测特异性 | |
| TAMRA荧光探针 | TAMRA | 发射光谱广，其固有荧光产生背景信号，会潜在降低基于TAMRA检测的灵敏度。使用TAMRA作为淬灭剂的探针通常更长（30-40 nt）,不推荐在多重qPCR过程中使用 | |
| Eclipse荧光探针 | Eclipse | 本底信号更低，并且Eclipse具有较宽的吸光范围，适用于多重qPCR反应 | |
| Dabcyl分子信标探针 | Dabcyl | Dabcyl由于其吸光特性且无残留荧光，已被广泛用作诊断探针（如分子信标）中的淬灭剂 |
常规替代增强型高级荧光探针
| 探针类型 | 淬灭修饰基团 | 荧光修饰基团 | 特点 |
|---|---|---|---|
| DBQ系列双重淬灭探针 | DBQ1/DBQ2/DBQ3 | 点击查看 IVD qPCR探针修饰基团说明 |
在探针中间额外修饰了一个特殊淬灭基团，和3’的淬灭基团形成双重淬灭，能显著降低荧光本底信号，提高荧光增量。推荐替代BHQ系列，尤其适用于较长片段的探针序列。DBQ1/DBQ2/DBQ3可部分替代BHQ系列。 |
| SF系列亲水改性探针 | 点击查看 IVD qPCR探针修饰基团说明 |
SF670/SF695/SF565 | 针对原始Cy系列水溶解性差的缺点，进行了亲水性改造，荧光强度得到显著提高。SF670、SF695和SF565可替代Cy5、Cy5.5和Cy3。 |
| SX系列荧光增强型探针 | SX670 | 和原始替代荧光基团相比，其荧光强度能得到倍数级的提高。目前已开发了SX670用于替代Cy5。 |
DBQ1双淬灭探针和BHQ1常规探针对比实验
在相同的测试条件和环境下，常规探针组均为FAM-BHQ1修饰，双淬灭探针组均为FAM-DBQ1修饰，采用HPLC纯化，此次实验使用ABI 7500检测qPCR，DBQ1双淬灭探针无论是本底和荧光增量均明显优化BHQ1
SF670荧光探针和Cy5荧光探针对比实验
在相同的实验条件下测试SF670与Cy5常规淬灭探针实验对照。均采用HPLC纯化，此次实验使用ABI 7500检测qPCR， SF670荧光探针，本底荧光比CY5低，荧光增量比CY5高
SX670荧光探针和Cy5荧光探针对比实验
在相同的实验条件下测试XS670与Cy5常规淬灭探针实验对照。均采用HPLC纯化，此次实验使用ABI 7500检测qPCR， SX670荧光探针，荧光增量比CY5极大提高
质量控制
除标准质检外，针对于IVD qPCR应用的荧光探针，我们可以通过额外定制QC检测来给予进一步的质量保证。
荧光值酶切增量（FLU）：确保TaqMan探针、分子信标等常规双标记引物的荧光、淬灭基团功能完全正常。
酶切增量检测案例
对照组由于不含DNase I，双标记探针保持完整，荧光基团被淬灭，只检测到本底荧光值195.1；酶切组中由于含有DNase I，双标记探针被水解，荧光基团脱离淬灭范围，检测到明显的荧光增强，荧光值达到11486.9，为本底荧光的58.9倍，符合客户定制的质控标准。
人源污染检测（HSC）：避免引物污染有人gDNA。
人源污染检测（HSC）案例
（使用常规人源DNA对应的引物、探针，将待测Oligo作为模板，配制扩增体系，进行qPCR检测，检测扩增曲线及对应Ct值。A：45个反应循环内扩增曲线呈平线，系统判断无Ct值，则说明引物探针纯净，无人源模板污染；B：45个循环内，扩增曲线出现翘起，系统判断出Ct值，则说明引物探针有人源基因组DNA污染。
无模板对照检测（NTC）：杜绝阴性对照出现假阳性。
无模板对照检测（NTC）案例
（将订单中引物探针配制为qPCR体系，使用水作为模板，进行探针法qPCR反应，通过反应的扩增曲线及系统记录Ct值，判断引物探针中是否有模板污染。A：若45个循环内，扩增曲线为平线，系统判断无Ct值，则说明引物探针纯净，无模板污染；B：若45个循环内，扩增曲线出现翘起，系统判断出Ct值，则说明引物探针有模板污染。）
订购方式
直接登录引物合成网购系统，自助进行常规DNA合成的定制；
在下方“资源>文档下载”区下载对应的服务订购表，发送邮件至synth@sangon.com ，由订单中心技术人员处理您的询价；
资源
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 常规引物合成订购表 |
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