荧光定量PCR

服务简介

荧光定量PCR 技术，是通过在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，对起始模板进行定量分析的方法。实验采用两种定量方式，即绝对定量和相对定量。荧光定量PCR 可用于mRNA 表达量水平检测、MicroRNA 表达量水平检测和基因拷贝数检测。实验的方法可分为SYBR Green I 法和TaqMan 探针法。实时荧光PCR技术已广泛应用于临床及生命科学研究的各个领域中。在科研方面可定量分析各种基因的表达分析，基因突变和多态性分析，单核苷酸多态SNP测定及易位基因的检测;在医疗方面可用于免疫组化分析、临床疾病早期诊断、病原体检测、耐药性分析、肿瘤微小残留病变研究等。

荧光定量PCR常用术语：

--基线: 实时荧光定量PCR反应的基线是指在PCR开始的几个循环中(-般为3-15个循环) 的信号水平。此阶段的荧光信号变化量极小。低水平的基线信号相当于反应的背景或噪声。每个实时荧光定量PCR反应的基线应通过用户分析或扩增曲线自动分析，根据经验确定。基线的设置，会影响到荧光阈值及Ct值。

--荧光阈值: 荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光阈值默认是PCR 3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。

--Ct值: Ct值指的是PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的循环数。

--标准曲线: 标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。对已知拷贝数的标准样品做系列稀释，对不同稀释度的标准样品进行荧光定量PCR并记录Ct值，根据Ct值及拷贝数的对数绘制得到标准曲线，标准曲线的纵坐标代表起始拷贝数的对数，横坐标代Ct值。